一、薄层层析技术概述
薄层层析(Thin Layer Chromatography, TLC)是一种简单、快速、经济的分离分析技术，广泛应用于有机合成、药物分析、食品检测等领域。硅胶板作为最常用的薄层色谱固定相，具有分离效果好、操作简便等优点。本说明将详细介绍硅胶板的正确使用方法。
二、硅胶板的选择
1. 硅胶板厚度选择：
l 常规分析：0.20-0.25mm厚度最为常用，适用于大多数分离需求。
l 制备型分离：0.5-2.0mm厚度，可承载更多样品量。
l 高效薄层(HPTLC)：0.10-0.15mm厚度，分离效率更高。
2. 硅胶类型选择：
l 硅胶G：含有石膏粘合剂，机械强度较好。
l 硅胶H：不含粘合剂，适用于某些特殊分离。
l 硅胶GF254：含有荧光指示剂，在254nm紫外光下显示荧光淬灭,适用于某些特殊分离。
l 硅胶HF254：不含粘合剂,含有荧光指示剂，在254nm紫外光下显示荧光淬灭 。
三、样品准备与上样
1. 样品溶解:
u 使用挥发性有机溶剂(如甲醇、乙醇、二氯甲烷等)溶解样品；
u 样品浓度建议在0.5-5mg/mL范围内；
u 确保样品完全溶解，避免固体颗粒堵塞毛细管 。
2. 点样工具选择：
u 微量注射器：**控制上样量，适用于定量分析。
u 毛细管：操作简便，适用于快速定性分析。
u 自动点样器：用于高通量或**重复实验。
3. 上样操作要点：
u 点样位置：距薄层板底边1-1.5cm处。
u 点样直径：控制在2-3mm以内，多次点样时需等待前次溶剂挥发完全。
u 点样间距：相邻样品点间距不小于0.5cm。
u 标记起始线：用铅笔轻划标记，避免使用油性笔。
4. 上样量控制:
u 常规分析：1-5μL(约0.5-10μg物质)。
u 制备型TLC：10-100μL(根据板厚度调整)。
u 检测限要求高：可适当增加上样量，但需注意斑点扩散。
四、 展开系统选择与展开操作
1. 展开剂选择原则:
ü 根据样品极性选择合适比例的展开剂。
ü 常用展开剂体系：石油醚/乙酸乙酯、二氯甲烷/甲醇等。
ü 可参考文献或通过预实验优化比例。
2. 展开操作步骤：
ü 将适量展开剂倒入展开缸，液层高度约0.5cm；
ü 密闭展开缸，使缸内蒸汽饱和10-15分钟；
ü 将点样后的薄层板垂直放入展开缸；
ü 展开剂前沿上升至距顶端0.5-1cm时取出；
ü 立即用铅笔标记溶剂前沿位置 ；
3. 展开方式选择:
ü 上行展开：最常用，适用于大多数情况。
ü 下行展开：适用于Rf值较小的组分。
ü 双向展开：复杂混合物分离。
ü 多次展开：提高分离度。
4. 展开注意事项：
ü 展开缸需保持水平放置。
ü 避免展开过程中振动或移动展开缸。
ü 环境温度变化可能影响分离效果。
ü 展开过程应在通风橱中进行。
五、显色与结果分析
1. 显色方法：
Ø 紫外灯观察：适用于有紫外吸收或荧光物质。
Ø 碘蒸气显色：通用方法，多数有机物可显色。
Ø 显色剂喷雾：如茚三酮(氨基酸)、硫酸乙醇溶液(通用)等。
Ø 生物自显影：适用于抗生素等生物活性物质。
2. Rf值计算 Rf = 斑点中心移动距离 / 溶剂前沿移动距离 。
3. 结果记录:
Ø 拍照记录(普通光和紫外光)。
Ø 标注各斑点Rf值。
Ø 记录展开剂组成和显色方法。
六、常见问题与解决方案
1. 斑点拖尾 可能原因：
样品过载
硅胶板活性不合适
展开剂选择不当
解决方案：
减少上样量
活化或减活硅胶板
调整展开剂极性或添加改性剂(如酸、碱)
2. 斑点扩散 可能原因：
点样量过大
点样溶剂选择不当
点样速度过快
解决方案：
减少上样量
改用低沸点溶剂
分次点样，等待溶剂挥发
3. 分离效果差 可能原因：
展开剂选择不当
展开缸未饱和
环境温度波动
解决方案：
优化展开剂比例
延长展开缸饱和时间
控制实验环境温度
七、安全注意事项
1. 操作有机溶剂时应在通风橱中进行
2. 避免直接接触显色剂，必要时佩戴防护手套
3. 紫外灯观察时保护眼睛，避免直视紫外光源
4. 废弃硅胶板应按化学废弃物处理
5. 保持工作区域整洁，避免溶剂挥发积聚
八、硅胶板保存
1. 未使用的硅胶板应密封保存于干燥器中
2. 使用前可根据需要在105℃活化30分钟
3. 点样后的硅胶板应及时展开，避免长时间放置
4. 展开后的硅胶板可拍照存档后妥善处理
正确使用薄层层析硅胶板能够获得良好的分离效果，为后续分析提供可靠依据。实验者应根据具体样品性质和实验目的优化各项参数，积累经验以获得**分离效果。